Construcción de un vector de expresión para el gen SPSK_04019 que codifica para una Hsp70 de sporothrix schenckii y expresión de la proteína rHsp70

RESUMEN 

La esporotricosis es una micosis subcutánea causada por Sporothrix spp., un hongo cuyo punto de contacto inicial con el hospedador es la pared celular, donde las respuestas inmunitarias se inician a través de receptores inmunológicos. En estudios previos, identificamos una proteína de choque térmico de 70 kDa (Hsp70) asociada a la pared celular de S. schenckii, cuya expresión se modifica en respuesta al estrés oxidativo y que podría estar involucrada en los mecanismos de adhesión del hongo. Hsp70 es comúnmente considerada una proteína chaperona, pero se ha demostrado que tiene potencial como factor de virulencia, lo que motiva su estudio para comprender su posible efecto inmunoprotector en la esporotricosis, una micosis de origen ocupacional. El objetivo de este estudio fue clonar el marco de lectura abierta (ORF) del gen SPSK_04019, que codifica Hsp70 de S. schenckii, en el vector pJET1.2/blunt para posteriormente subclonarlo en el vector de expresión pET28a. Primero, sintetizamos ADNc mediante transcripción inversa a partir de ARN total de S. schenckii. Luego, amplificamos el ORF de Hsp70 por PCR y lo purificamos. Clonamos el producto purificado en el vector pJET1.2/blunt y posteriormente lo subclonamos en el vector pET28a. Confirmamos la clonación y los productos de subclonación mediante secuenciación y digestión con las enzimas BamHI y HindIII. Finalmente, la proteína rHsp70 obtenida a partir de la construcción en el vector pET28a fue expresada por inducción con isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) en un sistema bacteriano de E. coli, alcanzando una densidad óptica de 0.5 Abs a una longitud de onda de 595 nm para posteriormente realizar la purificación de la proteína recombinante a partir de cromatografía por columna de afinidad Niquel-agarosa. Este enfoque permitirá futuros estudios sobre el potencial de Hsp70 como agente inmunoprotector en la esporotricosis.

Palabras clave: Sporothrix schenckii; vector de expresión; Hsp70; proteína recombinante.